Phos-tag SDS-PAGE データ集 Histone H3
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Histone H3

Core component of nucleosome. Nucleosomes wrap and compact DNA into chromatin, limiting DNA accessibility to the cellular machineries which require DNA as a template. Histones thereby play a central role in transcription regulation, DNA repair, DNA replication and chromosomal stability. DNA accessibility is regulated via a complex set of post-translational modifications of histones, also called histone code, and nucleosome remodeling.
Mw; 15,400

 

泳動結果

histoneH3 corcemid

HeLa 細胞を,Ser/Thr キナーゼ阻害剤のcalyclinA(100 nM, 30 min)
あるいは
コルセミド(細胞が分裂期に同調します)処理後
細胞抽出液をSuperSepTM Phos-tagで泳動し
Histone H3のリン酸化亢進を調べています。

商品が推奨する泳動バッファーはTris-glycine ですが
より低分子量に適したTris-tricinも用いて比較しています。
ヒストンは低分子量なので,この場合は,Tris-tricineの方が分離が良いようです。

calyclinAで処理すると,リン酸化型バンドが3本観察されます。
それぞれを,部位特異的抗リン酸化抗体との交差性から,
(c)に示したように同定しました。

コルセミドで処理すると,リン酸化型バンドが6本観察されます。
それぞれを,部位特異的抗リン酸化抗体との交差性から,
(c)に示したように同定しました。

 

Reference なし
ゲルの条件

SuperSepTM Phos-tag: 50µM

Polyacrylamide: 12.5%(w/v)

和光純薬工業より販売

検出方法

 WB:

anti-HistoneH3
anti-pHistoneH3(pT3)
anti-pHistoneH3(pS10)
anti-pHistoneH3(pT11)
anti-pHistoneH3(pS28)


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